乙腈：色谱纯。 

A.2.4 70%乙醇溶液：取 350 mL 无水乙醇，纯水定容至 500 mL，混匀。

A.2.5 金线莲苷对照品，纯度≥98.0%。

A.2.6 金线莲苷标准储备液：称取金线莲苷对照品 60.00 mg，70%乙醇溶液溶解后定容至 50.0 mL， 得 1.20 mg/mL 标准储备液。避光，冷藏。

A.2.7 金线莲苷标准曲线工作液：分别准确吸取标准储备液 0 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、 3.00 mL、4.00 mL 和 5.00 mL 置于 5 mL 容量瓶中，加 70%乙醇溶液稀释至刻度，混匀，得到浓 度分别为 0 mg/mL、0.12 mg/mL、0.24 mg/mL、0.48 mg/mL、0.72 mg/mL、0.96 mg/mL、1.20 mg/mL 的标准系列工作液。临用时配制。

A.3 仪器设备

A.3.1 分析天平：感量 0.1 mg。 

A.3.2 超声清洗机：频率 40 kHz，功率不低于 250 W。 

A.3.3 高效液相色谱仪：配备蒸发光散射检测器。

A.3.4 鼓风干燥箱：温度精度控制±1℃。

A.4 试验步骤

A.4.1 样液制备 

取金线莲鲜品（60℃干燥至水分≤13.0%）或干品，粉碎过四号筛，备用。准确称取金线莲样 品 0.2 g（精确至 0.001g），至具塞三角烧瓶中，加 70%乙醇溶液 50.0 mL，密塞，称定重量，摇匀 后室温放置 15min 后，超声（功率 500W，频率 40 kHz）提取 10min，放冷后，称定重量，用 70% 乙醇溶液补足减失重量，摇匀后，过 0.45 μm 滤膜后，即得供试品溶液。 空白样品溶液：70%乙醇溶液。

A.4.2 测定

 液相色谱参考工作条件如下：

a) 色谱柱：Agilent Zorbax NH2 色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)。

b) 流动相：乙腈:水=85:15（体积比）；

c) 流速：1.0 mL/min；

d) 柱温：25℃；

e) 雾化室温度：70℃；

f) 进样量：10 µL；

g) N2 流速：1.5 L/min；

h) 增益值：4。

A.4.3 标准工作曲线绘制 

        将金线莲苷标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪进行测定，记录色谱峰面积，以浓度的对 数（logC）为横坐标，以峰面积的对数（logA）为纵坐标，绘制标准工作曲线。金线莲苷对照品 和样液的参考液相色谱图参见附图 A.1 和 A.2。

A.5 结果计算

                            按式（1）计算试样中金线莲苷的含量，计算结果保留三位数字。